紫外可見分光光度法　　紫外-可見分光光度法是在190～800nm波長范圍內(nèi)測定物質(zhì)的吸光度，用于鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測定的方法。當(dāng)光穿過被測物質(zhì)溶液時，物質(zhì)對光的吸收程度隨光的波長不同而變化。因此，通過測定物質(zhì)在不同波長處的吸光度，并繪制其吸光度與波長的關(guān)系圖即得被測物質(zhì)的吸收光譜。從吸收光譜中，可以確定大吸收波長λmax和小吸收波長λmin。物質(zhì)的吸收光譜具有與其結(jié)構(gòu)相關(guān)的特征性。因此，可以通過特定波長范圍內(nèi)樣品的光譜與對照光譜或?qū)φ掌饭庾V的比較，或通過確定大吸收波長，或通過測量兩個特定波長處的吸收比值而鑒別物質(zhì)。用于定量時，在大吸收波長處測量**濃度樣品溶液的吸光度，并與**濃度的對照溶液的吸光度進(jìn)行比較或采用吸收系數(shù)法求算出樣品溶液的濃度。　　儀器的校正和檢定　　1.波長 由于環(huán)境因素對機(jī)械部分的影響，儀器的波長經(jīng)常會略有變動，因此除應(yīng)定期對所用的儀器進(jìn)行**校正檢定外，還應(yīng)于測定前校正測定波長。常用汞燈中的較強(qiáng)譜線237.83nm，253.65nm，275.28nm，296.73nm，313.16nm，334.15nm，365.02nm，404.66nm，435.83nm，546.07nm與576.96nm；或用儀器中氘燈的486.02nm與656.lOnm譜線進(jìn)行校正；鈥玻璃在波長279.4nm，287.5nm，333.7nm，360.9nm，418.5nm，460.0nm，484.5nm，536.2nm與637.5nm處有尖銳吸收峰，也可作波長校正用，但因來源不同或隨著時間的推移會有微小的變化，使用時應(yīng)注意；近年來，常使用高氯酸鈥溶液校正雙光束儀器，以10%高氯酸溶液為溶劑，配制含氧化鈥(Ho2O3)4%的溶液，該溶液的吸收峰波長為241.13nm，278.lOnm，287.18nm，333.44nm，345.47nm，361.31nm，416.28nm，451.30nm，485.29nm，536.64nm和640.52nm。　　儀器波長的允許誤差為：紫外光區(qū)±1nm，500nm附近±2nm。　　2.吸光度的準(zhǔn)確度 可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。取在120℃干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，在規(guī)定的波長處測定并計(jì)算其吸收系數(shù)，并與規(guī)定的吸收系數(shù)比較，應(yīng)符合表中的規(guī)定。　　-----------------------------------------------------------------------------------　　波長/nm 235(小) 257(大) 313(小) 350(大)　　-----------------------------------------------------------------------------------　　吸收系數(shù)()的規(guī)定值 124.5 144.0 48.6 106.6　　吸收系數(shù)()的許可范圍 123.0～126.0 142.8～146.2 47.0～50.3 105.5～108.5　　-----------------------------------------------------------------------------------　　3.雜散光的檢查 可按下表所列的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在規(guī)定的波長處測定透光率，應(yīng)符合表中的規(guī)定。　　----------------------------------------------　　試劑 濃度/%(g/ml) 測定用波長/nm 透光率/%　　----------------------------------------------　　鈉 1.00 220 <0.8　　亞硝酸鈉 5.00 340 <0.8　　----------------------------------------------　　對溶劑的要求　　含有雜原子的有機(jī)溶劑，通常均具有很強(qiáng)的末端吸收。因此，當(dāng)作溶劑使用時，它們的使用范圍均不能小于截止使用波長。例如甲醇、乙醇的截止使用波長為205nm。另外，當(dāng)溶劑不純時，也可能增加干擾吸收。因此，在測定供試品前，應(yīng)先檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求，即將溶劑置1cm石英吸收池中，以空氣為空白(即空白光路中不置**物質(zhì))測定其吸光度。溶劑和吸收池的吸光度，在220～240nm范圍內(nèi)不得超過0.40，在241～250nm范圍內(nèi)不得超過0.20，在251～300nm范圍內(nèi)不得超過0.10，在300nm以上時不得超過0.05。　　測定法　　測定時，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波長±2nm以內(nèi)測試幾個點(diǎn)的吸光度，或由儀器在規(guī)定波長附近自動掃描測定，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確。除另有規(guī)定外，吸收峰波長應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長±2nm以內(nèi)，并以吸光度大的波長作為測定波長。一般供試品溶液的吸光度讀數(shù)，以在0.3～0.7之間為宜。儀器的狹縫波帶寬度宜小于供試品吸收帶的半高寬度的**之一，否則測得的吸光度會偏低；狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減小狹縫寬度時供試品的吸光度不再增大為準(zhǔn)。由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，或由儀器自動扣除空白讀數(shù)后再計(jì)算含量。　　當(dāng)溶液的pH值對測定結(jié)果有影響時，應(yīng)將供試品溶液的pH值和對照品溶液的pH值調(diào)成一致。　　1.鑒別和檢查 分別按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。　　2.含量測定 一般有以下幾種方法。　　(1)對照品比較法 按各品種項(xiàng)下的方法，分別配制供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分規(guī)定量的**±10%，所用溶劑也應(yīng)**一致，在規(guī)定的波長處測定供試品溶液和對照品溶液的吸光度后，按下式計(jì)算供試品中被測溶液的濃度：　　cx=(Ax/AR)cR　　式中 cx為供試品溶液的濃度；　　Ax為供試品溶液的吸光度；　　cR為對照品溶液的濃度；　　AR為對照品溶液的吸光度。　　(2)吸收系數(shù)法 按各品種項(xiàng)下的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸光度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量。用本法測定時，吸收系數(shù)通常應(yīng)大于100，并注意儀器的校正和檢定。　　(3)計(jì)算分光光度法 計(jì)算分光光度法有多種，使用時應(yīng)按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。當(dāng)吸光度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時，波長的微小變化可能對測定結(jié)果造成顯著影響，故對照品和供試品的測試條件應(yīng)盡可能一致。計(jì)算分光光度法一般不宜用作含量測定。　　(4)比色法 供試品本身在紫外-可見光區(qū)沒有強(qiáng)吸收，或在紫外光區(qū)雖有吸收但為了避免干擾或提高靈敏度，可加入適當(dāng)?shù)娘@色劑，使反應(yīng)產(chǎn)物的大吸收移至可見光區(qū)，這種測定方法稱為比色法。　　用比色法測定時，由于顯色時影響顯色深淺的因素較多，應(yīng)取供試品與對照品或標(biāo)準(zhǔn)品同時操作。除另有規(guī)定外，比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液，然后依次加入等量的相應(yīng)試劑，并用同樣方法處理。在規(guī)定的波長處測定對照品和供試品溶液的吸光度后，按上述(1)法計(jì)算供試品濃度。　　當(dāng)吸光度和濃度關(guān)系不呈良好線性時，應(yīng)取數(shù)份梯度量的對照品溶液，用溶劑補(bǔ)充至同一體積，顯色后測定各份溶液的吸光度，然后以吸光度與相應(yīng)的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)供試品的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得其相應(yīng)的濃度，并求出其含量。 紫外可見分光光度計(jì)故障問題解決方案

　　1、紫外可見分光光度計(jì)噪音較大

　　原因：光源燈泡使用時間超過壽命期

　　處理方法：更換光源燈泡

　　2、在使用過程中，出現(xiàn)數(shù)字顯示不能歸零，同時伴有圖線記錄基線位置偏高

　　①光電倍增等老化，性能降低

　　②信號處理板可能發(fā)生故障

　　③前置放大版出現(xiàn)故障，引起反饋量增大

　　處理方法：

　　①開機(jī)通電，先做記錄故障曲線，再與原始記錄的標(biāo)準(zhǔn)曲線對照，找出異同點(diǎn)，并作一下定性定能分析。然后用一只同型號規(guī)格的新光電倍增管替換機(jī)上的光電管，再開機(jī)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果記錄出來的圖線并沒有什么變化，由此證明光電倍增管沒有老化變質(zhì)。

　　②進(jìn)一步檢查信號處理板，未發(fā)現(xiàn)信號處理板各元器件損壞，對影響靈敏度有關(guān)的電位器檢測，結(jié)果測得數(shù)據(jù)正常，這說明信號處理板沒有故障。

　　3、自檢時提示波長自檢出錯

　　原因：

　　自檢過程中可能打開過儀器樣品室的蓋子

　　處理方法：

　　關(guān)上儀器樣品室蓋子，重新自檢

　　4、儀器自檢時提示通訊錯誤

　　原因：

　　儀器與電腦之間的數(shù)據(jù)線沒有連接好

　　處理方法：

　　連接好數(shù)據(jù)線，重新打開儀器和軟件，重新自檢

　　5、測試過程中提示能量太低

　　原因：

　　①光源燈泡使用時間超過壽命期

　　②樣池中有不透光的東西擋住了光

　　處理方法：

　　更換光源燈泡；拿走擋光的物品